技術データ
淡水化用カラム/プレートの使用説明書 c18
製品紹介
C18脱塩カラム／プレートは、オクタデシル官能基を有するC18シリカゲルマトリックスで充填されており、高い疎水性と非極性化合物に対する優れた保持特性を備えています。C18脱塩カラム／プレートは、塩を保持することなく、DMTを含むプライマー／オリゴ／DNA分子を吸着できるため、高純度のプライマー／オリゴ／DNA製品が得られます。
選択ガイド
BM Life Sciencesは、様々なサイズのC18脱塩カラム／プレートを提供しており、プライマー／オリゴヌクレオチド濃度に応じて適切な脱塩カラムをお選びいただけます。バッチ処理には、96ウェル脱塩プレートをお選びいただけます。
| 製品番号 | 規範 | 適用可能なオリゴヌクレオチドの仕様 | 参照手順 |
| スペック18W150 | 50mg/1mL | 10nmol～200nmol | ステップ5 |
| SPEC18W3100 | 100mg/3mL | 10nmol～600nmol | ステップ1 |
| スペック18W3300 | 300mg/3mL | 10nmol - 2.opmol | ステップ2 |
| SPEC18W61000 | 1g/6mL | 1 umol - 6 umol | ステップ3 |
| SPEC18W9630 | 30mg/96ウェルプレート | 5nmol～100nmol | ステップ4 |
| SPEC18W9650 | 50mg/96ウェルプレート | 10nmol～200nmol | ステップ4 |
| SPE15C18W9680 | 80mg/96ウェルプレート（1.5ml 96ウェルプレート） | 10nmol～500nmol | ステップ5 |
| SPE23C18W9680 | 80mg/96ウェルプレート（2.3ml 96ウェルプレート） | 10nmol～500nmol | ステップ5 |
注記
C18 クリーニングカラム/プレートは、HPLC および PAGE 精製後の生の製品およびプライマー/オリゴを脱塩することもできます。詳細については手順 5 を参照してください。
試薬
アセトニトリルクロマトグラフィーグレード
0.1 M TEA、PH7.0
0.5M NaCl
フラッシング溶液（0.5 M NaClに溶解した5％アセトニトリル）
3%トリフルオロ酢酸（TFA）
脱イオン水
20％アセトニトリル
TE緩衝液：10 mmol/Lトリス-Cla、1 mmol/L EDTA、PH 8.0
ステップ1
サンプル準備
オリゴヌクレオチドサンプルに 0.5 M NacI を加えて 2 mL にします。
淡水化カラムの活性化
活性化: カラムを活性化するためにアセトニトリル 1 mL を使用しました。
平衡化: カラムを 1 mL の 0.1 M TEAA 溶液 (PH7.0) でバランスさせます。
洗浄プロセス
1. オリゴヌクレオチドを含む溶液 2 mL を脱塩カラムに通します。
2. 失敗したシーケンスを除去するために、1 mL のフラッシング溶液でカラムを 2 回すすいでください。
3. カラムを1mlの脱イオン水で2回すすぎ、塩を除去します。
4. カラムを1mlの3%トリフルオロ酢酸で2回すすぎ、DMTを除去し、吸着層がオレンジ色に変わるのを観察します。
5. 脱塩カラムを1mLの脱イオン水で2回すすぎ、トリフルオロ酢酸と残留塩を除去します。
6. 20%アセトニトリル1mlを溶出して組み立てます。
ステップ2
サンプル準備
オリゴヌクレオチドサンプルに 0.5 M NacI を加えて 4 mL にします。
淡水化カラムの活性化
活性化: カラムを活性化するためにアセトニトリル 2 mL を使用しました。
平衡化: 2 mL カラムを 0.1 M TEAA (PH 7.0) でバランスさせます。
洗浄プロセス
1. オリゴヌクレオチドを含む溶液 4 mL を脱塩カラムに通します。
2. 失敗したシーケンスを除去するために、2 ml のフラッシング溶液でカラムを 2 回すすいでください。
3. カラムを2mlの脱イオン水で2回すすいで塩を除去します。
4. カラムを 2ml の 3% トリフルオロ酢酸で 2 回すすいで DMT を除去します。吸着層はオレンジ色がかった赤色に変わります。
5. 2 mLの脱イオン水でカラムを2回すすぎ、トリフルオロ酢酸と残留塩を除去します。
6. 20%アセトニトリル2mlを溶出して組み立てます。
ステップ3
サンプル準備
オリゴヌクレオチドサンプルに 0.5 M Nac を加えて 10 mL にします。
淡水化カラムの活性化
活性化: カラムを活性化するために 5 mL のアセトニトリルを使用しました。
平衡化: カラムを 10 mL の 0.1 m TEAA (PH 7.0) でバランスさせました。
洗浄プロセス
1. オリゴヌクレオチドを含む溶液10 mLを脱塩カラムに通しました。
2. 失敗したシーケンスを除去するために、カラムを 5 mL のフラッシング溶液で 2 回洗浄しました。
3. カラムを5mLの脱イオン水で2回すすぎ、塩を除去します。
4. カラムを 5 mL の 3% トリフルオロ酢酸で 2 回洗浄して DMT を除去し、吸着層がオレンジ色がかった赤色に変わっていることを確認します。
5. カラムを5mlの脱イオン水で2回すすぎ、トリフルオロ酢酸と塩の残留物を除去します。
6. 20%アセトニトリル5mlを溶出して回収する。
ステップ4
サンプルの準備
オリゴヌクレオチドサンプルに 0.5 M Nacl を加えて 0.5 mL にします。
96ウェルプレートの活性化
活性化: 96 ウェル プレートの各ウェルにアセトニトリル 0.5 mL を通しました。
平衡: 0.5 mL の 0.1 M TEAA 溶液 (pH 7.0) で 96 ウェル プレートを平衡化します。
清掃手順
1. オリゴヌクレオチドを含む溶液 0.5 mL を 96 ウェル プレートに通します。
2. 96 ウェル プレートを 0.5 mL の洗浄液で 2 回すすぎ、不良配列を除去します。
3. 96 ウェル プレートを 0.5 mL の脱イオン水で 2 回すすぎ、塩を除去します。
4. 96ウェルプレートを0.5mlの3%トリフルオロ酢酸で2回洗浄してDMTを除去し、吸着層がオレンジ色に変わるのを観察します。
5. 96 ウェル プレートを 0.5 mL の脱イオン水で 2 回すすぎ、トリフルオロ酢酸と塩の残留物を除去します。
6. 20%アセトニトリル0.5mlを溶出させ、材料を回収します。
ステップ5
サンプルの準備
オリゴヌクレオチドサンプルに 0.5 M Nacl を加えて 1.2/2 mL にします。
96ウェルプレートの活性化
活性化: 96 ウェル プレートの各ウェルに 1 ～ 4 ml (0.5 mL) のアセトニトリルを流し込みます。
平衡化: 96 ウェル プレートに 0.1 M TEAA 溶液 (PH 7.0) を 1 ～ 4 mL 加えてバランスをとります。
洗浄プロセス
1. オリゴヌクレオチドを含む溶液 0.5～2 mL を 96 ウェル プレートに通します。
2. 96 ウェル プレートを 1/2 mL の洗浄液で 2 回すすぎ、不要な配列を除去します ;)
3. 96 ウェル プレートを 1/2 mL の脱イオン水で 2 回すすぎ、塩を除去します。
4. 96ウェルプレートを1/2mlの3%トリフルオロ酢酸で2回洗浄してDMTを除去し、吸着層がオレンジ色がかった赤色に変わるのを観察します。
5. 96 ウェル プレートを 1/2 mL の脱イオン水で 2 回すすぎ、トリフルオロ酢酸と塩の残留物を除去します。
6. 20%アセトニトリル1/2mlを溶出し、材料を回収します。
ステップ6
試薬
アセトニトリルクロマトグラフィーグレード
0.05 M TEA、PH 7.0
2 Mティー、PH 7.0
脱イオン水（RNaseを含まないRNA分子の脱塩および精製用）60％アセトニトリル（0.5％NH4OHを含む水に溶解）
20%アセトニトリル（脱保護後のDNAまたはRNA分子の脱塩）
TE緩衝液：10 mmol/Lトリス-Cla、1 mmol/L EDTA、PH 8.0
サンプル準備
HPLC精製オリゴ：最終アセトニトリル濃度が5%以下になるように、HPLC精製オリゴに適量の0.1 M TEAAを添加します。精製オリゴ：オリゴヌクレオチドを含むゲル断片を0.05 M TEAAに溶解し、ゲル断片を取り除き、オリゴを少なくとも2 mLの0.1 M TEAAに溶解します。
NH4OH または AMA に溶解したオリゴ: 乾燥するまで蒸発させ、2 mL の 0.1 M TEAA に溶解します。
淡水化ポンプの起動
活性化: カラムを活性化するためにアセトニトリル 1 mL を使用しました。
平衡化: 1 mL 2 M TEAA カラム (pH 7.0) のバランスをとります。
HPLC精製のためのオリゴ脱塩手順
1. オリゴヌクレオチドを含む溶液を脱塩カラムに通します。
2. 脱塩カラムを1mLの脱イオン水で2回すすぎ、塩を除去します。
3. 1mlの60%アセトニトリルカラムを通して溶出し、回収します。
PAAG法で精製したオリゴの脱塩手順
1. オリゴヌクレオチドを含む溶液を脱塩カラムに通します。
2. 脱塩カラムを1mLの脱イオン水で2回すすぎ、塩を除去します。
3. 1mlの60%アセトニトリルカラムを通して溶出し、回収します。
合成後のDNAオリゴンの脱塩手順
1. オリゴヌクレオチドを含む溶液を脱塩カラムに通す。
2. 1 mL 0.1M TEAA カラムを 2 回すすぎ、失敗したシーケンスを除去します。
3. 脱塩カラムを1mlの脱イオン水で2回すすぎ、塩分を除去します。
4. カラムを1mlの20%アセトニトリルに通して組み立てます。
RNAオリゴ合成後の脱塩手順
1. オリゴヌクレオチドを含む溶液を脱塩カラムに通します。
2. カラムを2mlの0.1M TEAAで洗浄します。
3. カラムを2mLのRNaseフリー水で洗い流します。
4. 20%アセトニトリル（RNaseフリー水）2mlをカラムに通し、溶出して回収します。 オリゴヌクレオチドの保存
20% アセトニトリルに溶解し、4°C で保存したオリゴヌクレオチドは微生物の増殖を防ぎ、短期保存に適しています。
20% アセトニトリル溶液（または TE などのアルカリ緩衝液に溶解）中のオリゴヌクレオチドは、-20 °C という低温で長期間保存できます。
凍結乾燥粉末状のオリゴヌクレオチドは長期間保存できます。
警告
使用される試薬の量は推奨事項に過ぎず、それぞれの特定のケースごとに最適化する必要があります。
使用される試薬の量は推奨量に過ぎず、ケースごとに最適化する必要があります。
脱塩カラムは、カラム／プレート上の残留物を溶出させ、カラム／脱塩プレートの結合容量を向上させるために、十分な活性化平衡を経る必要があります。合成オリゴヌクレオチドのサンプリングは、洗浄やクロスコンタミネーションのためにCPG粉末がカラム／プレートに侵入するのを防ぐため、ゆっくりと行う必要があります。
C18 脱塩カラム/ウェーハはシリカマトリックスを使用し、適用可能な PH 範囲は 2 ～ 7 です。PH > 7.5 ではシリカマトリックスが容易に溶解し、PH
TFA を使用して DMT を脱塩する場合は、時間に注意してください。時間が長すぎるとプリンが除去される効果があります。
愛着を持つ
B&MユニバーサルCPGフリット合成カラム高速脱塩・精製技術
B&MユニバーサルCPGフリット合成カラム急速脱塩および精製技術：
B&MユニバーサルCPGフリットは、輸入された超高分子量超純粋ポリエチレンと輸入CPGパウダーから作られ、特殊な技術で処理されており、合成カラムでの合成効果が良好で、変異率が低く、製品品質が信頼できます。
Dr.Oligo/Mermadeシリーズの合成装置で合成が完了し、アンモニアが溶解すると、オリゴは合成カラムに直接溶出され、投与および排出後、追加の精製ステップなしで通常のPCR反応に直接使用できるため、操作が便利で、コストを節約し、納品が速くなります。
具体的な操作手順は以下のとおりです。
1、合成B＆MユニバーサルCPGフリット合成カラム/プレート400ul、75％アセトニトリル超純水混合物で2回洗浄し、合成残留試薬を除去します。
2、B&M ユニバーサル CPG フリット合成アンモニア分解カラム/プレート、90°C、80PSI、アンモニア分解 2 ～ 2.5 時間。
3、100%アセトニトリル400Lで合成カラム/プレートを2回洗浄します。
4、90%アセトニトリル超純水ブレンド400ulで合成カラム/プレートを2回洗浄し、ポンピングして乾燥させます。
5、合成カラム/プレート上のプライマーを溶出するための適切な量の溶出液。溶出液は超純水、3% トリエチルアミン超純水混合物、または約 20% アセトニトリル超純水混合物にすることができます。
6、溶出溶液は計量、分注、排出、包装され、出荷されます。